Verbesserte Expression von Proteinen in Schafviren
Dieses Virus verursacht Enzephalitis, Arthritis, Mastitis und chronische Lungenentzündung bei Schafen und stellt daher ein gravierendes gesundheitliches Risiko für die Tiere dar. Die Entwicklung von Impfstoffen gegen Lentiviren erwies sich als problematisch, u.a. weil nicht ausreichend Informationen über Zielantigene verfügbar waren, die eine Immunantwort zur Abwehr der Infektion stimulieren. Im Rahmen der gesamten MMV-Forschung haben Partner der Universität Turin in Italien versucht, virale Proteine zu entwickeln, die als Antigene in immunologischen Assays fungieren können. Um die Stärke der Immunantwort zu bestimmen, wurde die Teilung von T-Lymphozyten sowie die Zytokinproduktion gemessen. Der ELISA-Test (enzyme-linked immunosorbent assay) bestimmte auch den Umfang der Reaktion. In der Studie wurden zwei Sets viraler Proteine exprimiert. Die Struktur von Viren besteht aus einer äußeren Hülle, die das Kapsid umschließt, welches wiederum den Zellkern enthält. Die Expression der Kapsidproteine erfolgte in E.coli-Bakterien. Anschließend wurden die Proteine für die Verwendung in Immunoassays aufgereinigt. Das Forscherteam erarbeitete auch Protokolle für die Expression von Hüllproteinen. Drei Gene, die für die Proteine kodierten, wurden an Expressionsvektoren gebunden und anschließend in verschiedene Säugetierzellen transformiert. Anfängliche Probleme bei der Expression wurden durch ein System zur Codon-Optimierung behoben. Dabei wurde der Anteil der Codons (für das Protein kodierend) auf den des Expressionssystems der Wirtszelle angepasst. Erneut wurde die Expression beobachtet. Die Entwicklung von Impfstoffen könnte Schutz vor der heimtückischen Bedrohung durch MVV bieten. Das im Rahmen dieser Forschungen entwickelte rekombinante Hüllprotein könnte als Grundlage für weitere Impfstoffforschungen oder als diagnostisches Reagens in Immunoassays dienen.