Ulepszanie ekspresji białek wirusów owczych
Wirus Maedi-Visna (MVV) wywołuje zapalenie mózgu, zapalenie stawów, zapalenie sutka i przewlekłe zapalenie płuc u owiec i jako taki stwarza realne zagrożenie dla ogólnego dobrego samopoczucia tych zwierząt. Opracowanie szczepionek zapobiegających infekcjom lentiwirusowym okazało się problematyczne. Wynika to m.in. z braku informacji na temat antygenów docelowych, które będą stymulować odpowiedź immunologiczną w zwierzęciu w celu odparcia infekcji. W ramach ogólnych badań wirusa MVV partnerzy projektu z Uniwersytetu w Turynie we Włoszech postanowili opracować białka wirusowe do użytku jako antygeny w badaniach immunologicznych. W celu określenia poziomów odpowiedzi immunologicznej zmierzono proliferację komórek limfocytów T i wytwarzanie cytokin. W celu zmierzenia natężenia reakcji wykorzystano również enzymatyczny test immunosorpcyjny (ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay). Podczas badań dokonano ekspresji dwóch zestawów białek wirusowych. Strukturalnie wirus składa się z zewnętrznej otoczki otaczającej wewnętrzny kapsyd, który otacza z kolei materiał jądra. Dokonano ekspresji białek kapsydu w bakteriach E. coli, a następnie oczyszczono te białka do użytku w badaniach immunologicznych. Zespół pracował również nad protokołami ekspresji białek otoczki. Trzy geny kodujące te białka zostały związane z wektorami ekspresyjnymi, a następnie dokonano ich transformacji do różnych komórek ssaczych. Aby rozwiązać problem początkowego braku ekspresji, zastosowano system optymalizacji kodonów. Wiązało się to z dopasowaniem częstotliwości kodonu (kodującego białko) do częstotliwości systemu ekspresyjnego komórki gospodarza. Tym razem zaobserwowano ekspresję. Opracowanie szczepionki zapewniłoby ochronę przed zdradliwym zagrożeniem ze strony wirusa MVV. Rekombinacyjne białka otoczki opracowane w tych badaniach mogą służyć jako podstawa do dalszych badań nad szczepionkami lub jako odczynniki diagnostyczne w badaniach immunologicznych.
