Eclaircir la question de l'expression des gènes pour les protéines de liaison
Le facteur de réponse au sérum (SRF) régule l'expression des gènes précoces, des gènes contrôlant l'adhésion et la migration des cellules et l'expression de plusieurs gènes spécifiques aux muscles, une cible importante des SRF. La liaison exclusive des coactivateurs MAL et MKL2 permet la régulation différentielle de l'expression de l'action de SRF. L'activité de MAL et MKL2 est contrôlée par l'interaction régulée avec G-actine, une sous-unité de microfilaments que l'on trouve dans le cytosquelette. Il a été montré que la déplétion de G-actine se traduit par l'accumulation de MAL dans le noyau, où la liaison inhibe l'import nucléaire de MAL et l'activité transcriptionnelle. Le projet SRF cofactors («Cell Biology of SRF cofactors») visait à mieux comprendre comment la liaison de G-actine contrôle tous ces évènements. Les objectifs initiaux du projet consistaient à développer un système permettant de suivre MAL en temps réel et d'étudier les interactions entre MAL et l'actine et entre MAL et les SRF dans les cellules vivantes. MAL détecte les niveaux de G-actine dans la cellule avec un domaine appelé RPEL (élément de liaison de la G-actine). Des études ont révélé que les peptides RPEL1 et RPEL2 se lient à l'actine par des interactions hydrophobiques la plupart du temps. Pour tester la validité des résultats obtenus, les partenaires du projet ont développé des mutations de disruption pour interférer avec la liaison MAL-actine. Les résultats soutiennent le modèle original et montrent que toutes les mutations provoquaient au moins une dérégulation de MAL. Les chercheurs de SRF cofactors ont utilisé la méthode FRET (transfert d'énergie par résonance de Förster) pour surveiller l'interaction de MAL-actine pendant la signalisation. Dans des cellules fixes, on a observé le FRET entre les deux protéines suivantes: MAL-GFP et mCherry-actine. MAL est impliquée dans le mouvement et la métastase des cellules, aussi les résultats du projet encouragent-ils à poursuivre les efforts pour approfondir les connaissances sur l'interaction de MAL-actine. Cette voie pourrait se révéler utile dans le développement de nouveaux traitements anticancéreux.
